电泳仪和电泳槽的使用方法

来源：　类别：技术文章　更新时间：2009-02-23　阅读次

电泳仪：电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳，是指带电粒子在电场中的运动，不同物质由于所带电荷及分子量的不同，因此在电场中运动速度不同，根据这一特征，应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备，这在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪正是基于上述原理设计制造的。下面简单介绍其使用方法及注意事项。
● 使用方法
1．首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。
2．电泳仪电源开关调至关的位置，电压旋钮转到最小，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。
3．接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止，设定电泳终止时间，此时电泳即开始进行。
4．工作完毕后，应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态，并拨出电泳插头。
注意事项
1．电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。
2．仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3．由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4．在总电流不超过仪器额定电流时（最大电流范围），可以多槽关联使用，但要注意不能超载，否则容易影响仪器寿命。
5．某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必须先接好负载再开机，否则电压表指针将大幅度跳动，容易造成不必要的人为机器损坏。
6．使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。

夹芯式垂直电泳槽使用方法：
一、组成部件
(一)装有铂金丝的贮液槽一对，配有冷却装置及电泳缓冲液流出口。
(二)凹型橡胶框，配有玻璃板，可分别制作厚度为lmm、1.5mm的凝胶板，操作时根据需要选择适当厚度的玻璃板及梳子配套使用。
(三)样品孔模具(梳子)用于电泳加样。
(四)固定贮液槽的螺丝杆及螺母4对，28D、30型为5对。
(五)橡胶管五根。两根长的用于连接冷却水的出入口；中等长度的两根用于连接电极缓；中液的流出口；最短的一根用于连接贮液槽间的冷却水。
(六)导线1付。
● 二、使用方法
(一)清洗部件
上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框，必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。
(二)组装电泳槽
A、1、将四只固定螺杆插进一只贮液框(半上槽)的相应孔洞中，然后将贮液框仰放在桌上。
2、左手拿凹型槽橡胶�？�，右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶�？蚰� (注意手指不能接触灌胶面的玻璃板)。
3、将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上，其下缘必须对齐贮液槽框下缘。
4、双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合，并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央。
5、装上四只螺母，拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀，最好用双手按斜角位置双双逐渐拧紧。
6、将电泳槽垂直竖起，放在桌上，带短玻璃板的贮液槽称上槽(阴极端)，带长玻璃板的贮液槽称为下槽(阳极端)，在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10％琼脂沿长玻璃板下端灌入，为防止留存气泡，可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。
B、也可将槽垂直竖起，将带有玻璃的橡胶�？蛑苯臃湃氩壑�，对称拧紧螺丝后，用琼脂封底边。
(三)灌胶
1、先灌分离胶，待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水，夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。
2、用细头滴管吸取胶液，沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡，可稍拾起另一端(气泡往高处走)，不断加入胶液。若单层胶(分离胶)则加胶量约距离短玻璃板上端0.3厘米处，轻轻加少许水，双手轻轻将梳子插入，待胶凝后就可形成凹形加样孔。
3、为防止漏胶，在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水，但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。
4、胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折
射率不同的亮区。
(四)加样
1、松开连接上、下贮液槽两根橡皮管上的夹子，放掉槽内的蒸馏水，待水流完后，再夹紧夹子。
2、双手轻轻取出样品梳子，即可看到界线清楚的加样孔，将孔中水分吸去(注意千万不要碰坏孔沿的字面)。
3、在上、下贮液槽中加入缓；中液，液体高度应超过上贮液槽短玻璃板上缘。
4、用微量注射器吸取一定量的样品加到长、短玻璃板间的凹型凝胶样品孔内(注意加样动作要轻，针头不能碰坏胶面)。
(五)电泳
一贮液槽导线与电泳仪的负极相连，下贮液槽导线与电泳仪的正极相连。检查线路无误，方可按照所要求的电压电流进行电泳。
(六)取出胶板
电泳结束，旋松螺母，取出胶框，剥出玻璃板，在两块玻璃板下角空隙内，用刀片背面轻轻撬动，即可将胶面与一块玻璃板分开，将有胶板的玻璃板平放在桌上，双手轻轻沿凝胶底将胶片托起，放在大培养皿中染色，胶板经漂洗、脱色后即可看到清晰的分离条带。
注：DYCZ—28B、29型夹芯式电泳槽使用方法与此相同。DYCZ—28C型、28D型和30型电泳槽使用方法也与此相同，因是制作两块胶板，故实际形成三个贮液槽。请注意在操作时两个胶室的短玻璃板都要向里，中间为负极，两边为正极。
注意．可作两块胶的电泳槽，在作一块胶时，应将三头导线都插在电泳槽上，以免放在桌上误碰。